Si su proteína no es del mismo tamaño que su anticuerpo, puede eluir con 0.1M glicina, pH 2-3 y luego separar la proteína de interés del anticuerpo usando SEC (como superdex 200).
¿Qué es eluir una proteína?
Las proteínas se eluyen mediante un gradiente de cantidades crecientes de un disolvente orgánico, como el acetonitrilo. Las proteínas eluyen según su hidrofobicidad. Después de la purificación por HPLC, la proteína se encuentra en una solución que solo contiene compuestos volátiles y puede liofilizarse fácilmente.
¿Por qué las proteínas tienen un pH de elución bajo?
Se sabe que el uso de un tampón de pH bajo para la elución de la proteína A contribuye a la agregación del producto Sin embargo, un conjunto más limitado de pruebas sugiere que un pH bajo puede no ser el único causa de agregación en la cromatografía de proteína A, más bien, otras facetas del proceso pueden contribuir significativamente.
¿Cómo se hace la elución?
En química analítica y orgánica, la elución es el proceso de extraer un material de otro mediante lavado con un solvente; como en el lavado de resinas de intercambio iónico cargadas para eliminar los iones capturados. … Después de que las moléculas de solvente desplazan el analito, el analito se puede sacar de la columna para su análisis.
¿Cuántos anticuerpos necesitas para Coip?
Para los experimentos Co-IP de rutina, el anticuerpo que utilicé es no más de 2ug (En mi equipo, 1,4-2,0ug de anticuerpo es suficiente para capturar 2500-5000ug de lisado de proteína). Pero aún depende de los niveles de expresión de las proteínas objetivo en sus muestras, por lo que probablemente tenga que hacer algunas modificaciones.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
