Tabla de contenido:
- La siguiente es una descripción general de los diferentes pasos de un protocolo de tinción de inmunofluorescencia indirecta
- ¿Cómo se realiza la inmunofluorescencia?
- ¿Cómo se utiliza la inmunofluorescencia en una célula?
- ¿Qué es un ejemplo de inmunofluorescencia?
- ¿Para qué sirve la tinción de inmunofluorescencia?
Video: ¿Cómo hacer inmunofluorescencia?
2024 Autor: Fiona Howard | [email protected]. Última modificación: 2024-01-10 06:36
La siguiente es una descripción general de los diferentes pasos de un protocolo de tinción de inmunofluorescencia indirecta
- Planificación de experimentos y preparación de muestras. …
- Fijación de muestra. …
- Permeabilización celular. …
- Bloqueo. …
- Incubación de anticuerpos primarios. …
- Incubación de anticuerpos secundarios. …
- Contratinción y montaje.
¿Cómo se realiza la inmunofluorescencia?
Todos los pasos de incubación se realizan a temperatura ambiente
- Lave las células dos veces y use pinzas para colocar con cuidado el cubreobjetos con las células hacia arriba en la cámara humidificada.
- Fijar con formol al 4 % durante 10 minutos y lavar 3×.
- Permeabilizar con 0,1 % TX-100/PBS durante 15–20 minutos y lavar 3 veces.
¿Cómo se utiliza la inmunofluorescencia en una célula?
Protocolo de inmunofluorescencia para células adherentes
- Sembrar 1–1,5 x104 células por pocillo de un portaobjetos de 4 cámaras en 500 ml de medio de cultivo. Incubar a 37 °C al 5 % de CO2.
- 32–36 horas después de la siembra de células, retire el medio de cultivo celular y enjuague las células 3 veces con 500 µL de 1X PBS.
¿Qué es un ejemplo de inmunofluorescencia?
Por ejemplo, un investigador podría crear anticuerpos primarios en una cabra que reconozcan varios antígenos, y luego emplear anticuerpos secundarios de conejo acoplados con tinción que reconozcan la región constante del anticuerpo de cabra (" anticuerpos de conejo anti-cabra").
¿Para qué sirve la tinción de inmunofluorescencia?
La tinción de inmunofluorescencia (IF) es una técnica ampliamente utilizada en la investigación biológica y el diagnóstico clínico La IF utiliza anticuerpos marcados con fluorescencia para detectar antígenos diana específicos. Seguido de imágenes, es una técnica muy directa ya que realmente puedes ver algo.
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¿Cómo reducir la tinción de fondo en inmunofluorescencia?
Para reducir la unión de anticuerpos no específicos y, en consecuencia, reducir la señal de fondo, se recomienda usar una solución de bloqueo antes de la incubación con anticuerpos La solución de bloqueo más eficaz será ser el que contiene suero de la misma especie en la que se generó el anticuerpo secundario .
