La digestión de restricción se logra mediante la incubación de la molécula de ADN objetivo con enzimas de restricción: enzimas que reconocen y se unen a secuencias de ADN específicas y se escinden en nucleótidos específicos dentro o fuera de la secuencia de reconocimiento de la secuencia de reconocimiento.
¿Cómo se digieren las enzimas de restricción?
Protocolo de digestión de enzimas de restricción
- Agregue componentes a un tubo limpio en el orden que se muestra: …
- Incubar la reacción a temperatura de digestión (generalmente 37 °C) durante 1 hora.
- Detenga la digestión mediante inactivación por calor (65 °C durante 15 minutos) o agregue una concentración final de EDTA de 10 mM.
¿La enzima de restricción digiere el ADN?
Las enzimas de restricción también se pueden usar para generar extremos compatibles en productos de PCR. … En todos los casos, se utilizan una o más enzimas de restricción para digerir el ADN resultante en una inserción direccional o no direccional en el plásmido compatible.
¿Cómo funcionan las enzimas de restricción del ADN?
¿Cómo funcionan las enzimas de restricción? Como todas las enzimas, una enzima de restricción funciona coincidiendo entre formas Cuando entra en contacto con una secuencia de ADN con una forma que coincide con una parte de la enzima, llamada sitio de reconocimiento, envuelve el ADN y provoca una ruptura en ambas hebras de la molécula de ADN.
¿Qué enzima digiere el ADN?
Estas enzimas se denominan endonucleasas de restricción o enzimas de restricción, y pueden escindir moléculas de ADN en las posiciones en las que están presentes determinadas secuencias cortas de bases.
